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BSfectin

货号及规格:

CF10114-1 ml

T1

货号及规格

T1001-10 ml

 

描述

BSfectin是一种阳离子试剂,设计用于实现昆虫细胞的最佳转染。使用BEVS表达?#20302;?#26102;,Bsfectin可以稳定高效转染Sf9、Sf21和High5细胞。BSfectin可以用于静置培养和悬浮培养的细胞转染。

转染悬浮培养的细胞(以下的试剂的用量以125 ml摇瓶为例)

确认sf9细胞处于对数生长期(1.5~2.5百万/ml),活性大于95%。

1.       使用SF-SFM培养基稀释种子sf9细胞到80~100万/ml,然后在125 ml摇瓶中加入20 ml稀释后的细胞液。放在培养箱中摇床上震荡培养一个小时。

2.       对bacmid进行巴氏消毒,60℃1 h(?#37096;?#20197;使?#32654;?#24515;法除菌)

3.       对于每一个孔的转染的样品,准备下面的复合物

A,用1000 ul的T1培养基稀释55 ul的BSfectin,短暂的漩涡震荡。(在室温放30 min)

B, 同时用1000 ul的T1培养基稀释40 ug的bacmid。轻轻混?#31232;#?#22312;室温放30 min)

C, 然后将A和B的混合物混合,轻轻混匀(室温孵育20~30 min)。

4.       将大约2100 ul的DNA-BSfectin复合物与培养上清混合均匀,均?#28982;?#24930;滴?#25317;?#25671;?#21487;?#28165;中各处,置于27℃培养箱中的摇床上,振荡培养。

5.       一般培养5~7天可以收获。

6.       在悬浮培养制备病毒时,请根据摇瓶及其培养体积进?#22411;?#27604;例放大。

转染静置培养的细胞(以下试剂用量都是以六孔板的一个孔为例)

确认sf9细胞处于对数生长期(1.5~2.5百万/ml),活性大于95%。

7.       使用SF-SFM或Sf900 II培养基稀释种子sf9细胞到40万/ml,然后在六孔板中加入2 ml稀释后的细胞液,使得每个孔中的细胞数大约为80万。放在培养箱中培养一个小时使细胞贴壁。

8.       对bacmid进行巴氏消毒,60℃1 h(?#37096;?#20197;使?#32654;?#24515;法除菌)。

9.       对于每一个孔的转染的样品,准备下面的复合物

D,用100 ul的T1培养基稀释5.5 ul的BSfectin,短暂的漩涡震荡。(在室温放30 min)

E, 同时用100 ul的T1培养基稀释4 ug的bacmid,使终体积达到100 ul,轻轻混?#31232;#?#22312;室温放30 min)

F, 然后将D加入到E中,轻轻?#33633;?#28151;匀(室温孵育20~30 min)。

10.   将大约210 ul的DNA-BSfectin复合物与培养上清混合均匀:将平板倾斜后,均?#28982;?#24930;滴?#25317;?#23380;板上清中,将孔板平放轻轻晃动,混合均匀(或轻轻?#33633;?#19978;清混匀),27℃培养。

11.   一般培养5~7天可以收获。

12.   在方瓶中制备病毒时,请根据6-well-plate的表面积进?#22411;?#27604;例放大(将方瓶竖放,滴加DNA-BSfectin复合物)。

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