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HF-SFM昆虫细胞无血清培养基

HF-SFM是一种适于昆虫细胞培养的无血清无蛋白培养基,含有谷氨酰胺,干粉培养基。

货号与规格:

SF20212-2  10 L/包

SF20212-4  50 L/包 2×包/桶

应用:

HF-SFM是一种无血清无蛋白昆虫细胞培养基,经过优化,支持BTI-TN-5B1-4(Tn5,High Five)细胞系的最大细胞生长量和杆状病毒表达系

?#24120;˙EVS)的重组基因表达。此外,HF-SFM可支持High Five细胞生产重组蛋白。HF-SFM也是一种完全培养基,在使?#20204;?#19981;需要补充蛋

白质或者其他昆虫激素,也不需要补充谷氨酰胺

?#21487;?#22521;养基含40.15克干粉培养基

仅适用于科研或者进一步生产

干粉

适合昆虫细胞培养

28℃干燥避光保存

 

*注意:该产品仅适于科学研究或者进一步生产,不适于诊断或?#30239;啤?/B>

 

BTI-5B1-4(High Five)通常用于使用杆状病毒表达?#20302;常˙EVS)的重组蛋白表达。这种细胞能在HF-SFM中进行无血清悬浮培养。无血

清无蛋白HF-SFM培养基可以支持细胞实现最佳生长和重组基因表达。HF-SFM培养基可以支持High Five细胞长时间传代培养,最高细胞

密度超过5×106 cells/ml。

 

培养基信息:

·         适于培养High Five细胞

·         适于通过昆虫细胞杆状病毒表达?#20302;?#34920;达外源蛋白

·         该培养基为无血清无蛋白培养基,并适于生物反应器大规模培养

·         可以支持昆虫细胞长期传代(>20 代)

·         含有 Pluronic F-68、谷氨酰胺、碳酸氢钠

·         40.15 g/L

·         不同批次间HF-SFM培养基颜色可能会不同,这主要是由于培养基中水解物批次差异造成的。培养基颜色不会影响其培养效果。

 

运输和储存:

 

·         包装中放置冰块,低温运输。

·         干燥避光冷藏(2~8℃)。

 

培养基配制使用说明:

1.在适?#20808;?#22120;中加入90%终体积超?#20811;?#21152;入适量培养基搅拌溶解,补加超?#20811;?#33267;终体积,搅拌充分使其溶解。

2.根据需要,用 10 N氢氧化钠或者浓盐酸溶液调pH至6.0~6.2。

3.用0.2微米滤膜过滤除菌,溶液应在2~8℃条件下避光保存。

培养条件

培养基:HF-SFM

细胞系(株):BTI-TN-5B1-4 Trichoplusia ni(High Five)细胞

培养方式:悬浮培养或者贴壁培养

培养容器:摇瓶、转瓶(spinner bottle)或者方瓶

培养箱条件:不需要湿度和二氧化碳调控,只需要保证合适的气体交换和最大限度减少光照。

细胞复苏

1.      将冻存管37℃水浴?#26438;?#28342;解,当其中还有微量冰块时拿出。

2.      使用预热过的培养基将冻存管中的细胞进行稀释,细胞密度0.5~1×106 cells/ml为宜,并根据使用的培养容器选择合适的培养体积。

3.      将细胞置于培养箱中震荡器上,100~140 rpm,~27℃,不需要湿度和二氧化碳调节。拧松瓶盖,便于气体交换。

4.      最初两次传代,当细胞密度超过1×106 cells/ml后将其稀释到0.5×106 cells/ml,之后?#24066;?#32454;胞密度超过2×106 cells/ml后传代。

注意:建议每三个月或者传代30次后重新复苏细胞。

悬浮细胞传代培养

 昆虫细胞对物理损伤和剪切力是非常敏感的。如果使用转瓶(spinner flasks),应该确保桨叶安装正确,不能与瓶底或者瓶壁接触。

1.      如果细胞结团,将细胞悬液摇晃混匀,静置1~2 min,细胞团块会?#26438;儷两?#21040;瓶底,吸取上部的培养液,即可将细胞团块去除。也

可以将所有的细胞悬液转移到锥形离心管中,任何细胞团将在1~2 min内?#20004;?#21040;底部,将细胞团转移到10 ml离心管中,反复轻轻?#33633;潁?/FONT>

将细胞进行分散,如果需要继续处理,重复以上步骤。用力?#33633;?#20135;生的剪切力,可能会造成细胞损伤。

2.      计数活细胞密度。

3.      将细胞接种于无菌容器中经过预热的培养基中,接种密度0.5~1×106 cells/ml。(30~50 ml/125-ml摇瓶,75~100 ml/100-ml 转瓶)。

4.      将细胞置于培养箱中,~27,不需要湿度和二氧化碳调节。拧松瓶盖,便于气体交换。

5.      摇瓶放于震荡期上,120~140 rpm,转?#20811;?#24230;设定为75 rpm(最?#39318;克?#24230;应根据具体转瓶具体参数进行优化)。

6.      当细胞密度超过2×106 cells/ml,使用无菌预热的HF-SFM培养基稀释传代培养。

注意:为了除去细胞培养物中的细胞碎片和积累的代谢副产物,每2~3周应该100×g,5 min离心传代一次。

贴壁细胞传代培养

1.      观察细胞是否达到80~90%汇?#19979;省?#23558;上清去除。

2.      添加4 ml(每T-25方瓶)预热的HF-SFM培养基,反复?#33633;潁?#20351;细胞从瓶壁脱落。

3.      观察细胞是否已经从瓶壁脱落。

4.      将所有的细胞悬液转移到锥形离心管中,任何细胞团将在1~2 min内?#20004;?#21040;底部,将细胞团转移到10 ml离心管中,反复轻轻?#33633;潁?/FONT>

         将细胞进行分散,如果需要继续处理,重复以上步骤。用力?#33633;?#20250;产生比较大的剪切力,造成细胞损伤。

5.      计数活细胞密度。

6.      按照2~5×104 cells/cm2接种密度接种细胞。

7.      将细胞置于培养箱中培养,~27℃,无需湿度和二氧化碳调节。拧松瓶盖,便于气体交换。

8.      每2~3天更换上清,当细胞达到90%汇?#19979;?#21518;传代。

注意:

BTI-TN-5B1-4(High Five)细胞是非贴壁依赖型细胞,可在贴壁培养和悬浮培养间转换,如果接种密度合适,不会影响细胞活性,形态

或者生长速率。

BRI-5B1-4High Five)细胞适应至HF-SFM培养基

使用HF-SFM培养基培养High Five细胞,我们推荐采用逐步适应法。进行适应的细胞应处于?#20801;?#29983;长中期,活性不低于90%。

1.      细胞生长到50%汇合度?#20445;?#23558;有血清培养的上清移除1/4,更换为HF-SFM。

2.      在培养箱中继续培养。

3.      当达到90%汇合度后传代,进行传代,HF-SFM培养基比例提高到50%。

4.      重复以上步骤,依次将HF-SFM培养基比例调整为75%,90%,100%。

当在100%的HF-SFM培养基中传代多次后,细胞可以?#20013;?#29983;长,则认为已经适应成功。

 

细胞冻存

冻存

1.        准?#22797;?#20110;?#20801;?#29983;长中期的细胞,细胞活性>90%。

2.        确定需要的细胞数量和冻存液体积,冻存液中细胞密度应达到 0.5~1.0 × 107 cells/ml。

3.        冻存液由92.5%SF-SFM(新鲜培养基和条件培养基的比例为50:50),7.5% DMSO。冻存液4°C保存。

4.        将培养物100 g离心6 min,去除上清,使用冻存液重悬细胞。

5.        根据培养规模将细胞分装于合适的冻存管中,如4.5 ml~5.0 ml/支。

6.        推荐使用自动化冻存设备或者常规冻存盒进行冻存。

7.        细胞可以在液氮中长期稳定保存,但不确定最长保存期限。

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