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SF-SFM昆虫细胞无血清培养基

SF-SFM是一种适于昆虫细胞培养的无血清无蛋白培养基,含有谷氨酰胺,干粉培养基。

货号及规格:

SF20112-2  10 L/包

SF20112-4  50 L/包 2×包/桶

应用:

SF-SFM是一种无血清蛋白培养基,针对Sf9和Sf21昆虫细胞系的无血清培养而开发和优化。细胞可以从无血清或者添加血清的培养基中

直接转移到SF-SFM中进行传代培养,而无需经过适应。SF-SFM中的培养通常可以达到1×107 cells/ml的细胞密度,细胞活性大于95%。

Sf9和Sf21细胞可在SF-SFM培养基中传代超过20次而活性不降低。

?#21487;?#22521;养基含42.1克干粉培养基,干燥避光,2-8°C保存

 

SF-SFM 培养基使用说明

*注意:该产品仅适于科学研究或者进一步生产,不适于诊断或?#30239;啤?

培养基应用:

·         适于培养Sf9和Sf21细胞

·         适于通过昆虫细胞杆状病毒表达?#20302;?#34920;达外源蛋白

·         该培养基为无血清无蛋白培养基,并适于生物反应器大规模培养

·         可以支持昆虫细胞长期传代(>20 代)

·         可将其他无血清或者无血清培养基中的细胞直接转移至该培养基中培养,无须经过传代培养

·         使用该培养基可获得高滴度野生型AcNPV

·         含有 Pluronic F-68、谷氨酰胺、碳酸氢钠

·         42.1 g/L

 

运输和储存:

·         包装中放置冰块,低温运输。

·         干燥避光冷藏(2~8°C)。

 

培养基配制使用说明:

1.在适?#20808;?#22120;中加入90%终体积超?#20811;?#21152;入适量培养基搅拌溶解,补加超?#20811;?#33267;终体积,搅拌充分使其溶解。

2.根据需要,用 10 N氢氧化钠或者浓盐酸 溶液调pH至6.0~6.2。

3.用0.2微米滤膜过滤除菌,溶液应在2~8°C条件下避光保存。

4.过滤前加入1毫升?#21487;?组分B(或可过滤后无菌添加)。

 

细胞适应

可以通过两种方式将细胞适应至该培养基中:1)将在其他培养基中培养的细胞直接转移至SF-SFM中;2)逐量更换培养基。在细胞适应

过程中应取对数生长中期的细胞,细胞活性>90%。

 

静置培养

将方瓶中培养上清去除,添加5 ml新鲜培养基至T-25方瓶中(15 ml/T-75方瓶)。反复吹打后,制备细胞悬液,使用新鲜培养基稀释至合

适密度,1.2×106 cells/T-25方瓶或者3.6×106 cells/T-75方瓶,置于生化培养箱中, 27±0.5°C培养。正常情况下,经过3~4天,汇合度达到100%,进行传代。

 

悬浮培养

摇床最高转速可达135 rpm.

摇床应可放置在生化培养箱中,27±0.5°C,不需要设置湿度和气体控制。

将摇瓶的盖?#26377;?#26494;1/4,即可保证摇瓶中气体?#25442;?#20805;分。

在SF-SFM中,Sf9细胞最大细胞密度超过1×107 cells/ml。在正常传代培养过程中需要每天计数细胞密度和细胞活性,当活细胞密度达到

~4.0×106 cells/ml?#20445;?#20351;用预热后的新鲜培养基(~20°C)将细胞稀释到1.0~1.5×106 cells/ml。

 

细胞冻存与复苏

 

冻存

1.        准?#22797;?#20110;对数生长中期的细胞,细胞活性>90%。

2.        确定需要的细胞数量和冻存液体积,冻存液中细胞密度应达到 0.5~1.0 × 107 cells/ml。

3.        冻存液由82.5%SF-SFM,7.5% DMSO,10% 胎牛血清组成。冻存液4°C保存。

4.        将培养物100 g离心6 min,去除上清,使用冻存液重悬细胞。

5.        根据培养规模将细胞分装于合适的冻存管中,如4.5 ml~5.0 ml/支。

6.        使用自动化冻存设备或者常规冻存盒进行冻存。

7.        细胞可以在液氮中长期稳定保存,但不确定最长保存期限。

 

复苏

1.        将冻存管37°C水浴,?#26438;?#35299;?#24120;?#31435;即喷洒酒精降低其温度。将解冻后的混合物转移至250 ml摇瓶中,加入50 ml培养基,置于生化 培养箱中27°C 培养。.

2.        复苏后前两次传代培养,细胞接种密度3×105~1×106 cells/ml最佳;之后可恢复正常传代。

 

重要信息:

不同批次的SF-SFM粉末培养基溶解后的颜色可能会发生变化,这主要是培养基中的水解物批间不一致导致的。培养基颜色对培

养基的培养效果没有影响。

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